Plasmide CRISPR/Cas9 KO Mitofilin (m): sc-429376

Présentation

Le gène murin **Immt** code la mitofiline, un composant central du complexe MICOS (système d’organisation des sites de contact mitochondriaux et des crêtes) qui maintient l’architecture de la membrane mitochondriale interne et la formation des jonctions de crêtes. La mitofiline soutient l’ultrastructure mitochondriale, coordonne les contacts entre les membranes interne et externe et influence l’importation des protéines ainsi que l’organisation de la chaîne respiratoire, des éléments essentiels à la phosphorylation oxydative. La perturbation d’**IMMT** altère la morphologie des crêtes, la dynamique mitochondriale et l’homéostasie bioénergétique, des processus largement impliqués dans la neurodégénérescence, la cardiomyopathie, les dysfonctionnements métaboliques et l’adaptation des cellules cancéreuses. En tant que nœud du couplage structure–fonction mitochondrial, **Immt** est fréquemment étudié dans les voies régissant la sensibilité à l’apoptose, la mitophagie et les réponses cellulaires au stress.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Mitofilin (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Immt dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Immt, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Immt à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Mitofilin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Immt pour l'étude de la signalisation de Mitofilin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Immt essentiels à la fonction de Mitofilin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Immt pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Mitofilin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Mitofilin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Immt. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Mitofilin plasmide HDR (m) et le Mitofilin (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Immt pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Immt définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.