Plasmide CRISPR/Cas9 KO MIP-3β (h): sc-403239
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- MIP-3β Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique MIP-3β, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: MIP-3β Antibody (ZZ22): sc-74233
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO MIP-3β (h) | sc-403239 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
CCL19 code la chimiokine MIP-3β (également appelée CCL19), un ligand de CCR7 qui dirige la chimiotaxie des lymphocytes T naïfs, des lymphocytes T mémoire centrale et des cellules dendritiques matures vers les tissus lymphoïdes. En modulant le trafic leucocytaire, elle favorise le « homing » vers les ganglions lymphatiques, la formation de la synapse immunologique et une présentation antigénique coordonnée au sein de la zone T. La signalisation MIP-3β–CCR7 s’articule avec des voies dépendantes des GPCR qui régulent le remodelage du cytosquelette, l’adhérence et la polarisation migratoire, influençant l’architecture et la fonction des organes lymphoïdes secondaires. Une expression ou une signalisation de CCL19 dérégulée a été associée à des profils modifiés d’infiltration immunitaire dans l’inflammation chronique, l’auto-immunité et les microenvironnements tumoraux, ce qui en fait une cible utile pour des études de mécanistique en immunologie.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MIP-3β (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CCL19 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CCL19, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CCL19 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MIP-3β.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CCL19 pour l'étude de la signalisation de MIP-3β, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de CCL19 essentiels à la fonction de MIP-3β
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CCL19 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le MIP-3β plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le MIP-3β plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CCL19. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le MIP-3β plasmide HDR (h) et le MIP-3β (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CCL19 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CCL19 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.