Plasmide Double Nickase (h) MINOS1: sc-417564-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) MINOS1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide MINOS1 Double Nickase (h) et le plasmide MINOS1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant MINOS1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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Plasmide Double Nickase (h) MINOS1 | sc-417564-NIC | 20 µg | $410.00 |
MINOS1 (mitochondrial inner membrane organizing system 1) code un composant central du complexe MICOS, qui contribue à façonner l’architecture des crêtes et à maintenir l’organisation de la membrane interne mitochondriale. En favorisant l’assemblage adéquat des supercomplexes de la chaîne respiratoire et des sites de contact intermembranaires, MINOS1 participe à l’efficacité de la phosphorylation oxydative, à l’import mitochondrial des protéines et à la dynamique de l’organite. La perturbation de facteurs associés à MICOS, dont MINOS1, est liée à des altérations de l’ultrastructure mitochondriale, à un stress bioénergétique et à des effets en aval sur l’apoptose et le métabolisme cellulaire. Ces processus sont fréquemment étudiés dans les travaux sur la neurodégénérescence, les myopathies et le remodelage métabolique associé au cancer, où les relations structure–fonction des mitochondries sont déterminantes.
MINOS1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus MINOS1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de MINOS1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de MINOS1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de MINOS1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.