Plasmide Double Nickase (m) MIF: sc-421649-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) MIF correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide MIF Double Nickase (m) et le plasmide MIF Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Mif. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: MIF Antibody (D-2): sc-271631
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) MIF | sc-421649-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) MIF | sc-421649-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le facteur inhibiteur de la migration des macrophages (MIF) est une cytokine pléiotrope codée, chez la souris, par le gène *Mif*, qui régule les réponses immunitaires innées et adaptatives, le trafic des leucocytes et la signalisation liée au stress. Le MIF interagit avec CD74/CD44 ainsi qu’avec des récepteurs de chimiokines tels que CXCR2/CXCR4 afin de coordonner l’activité des voies MAPK et NF-κB, modulant ainsi la production de cytokines et les programmes de survie cellulaire. Il participe également à la contre-régulation des glucocorticoïdes et au contrôle redox, reliant les signaux inflammatoires à des réponses métaboliques et prolifératives. Une dérégulation de la signalisation du MIF a été impliquée dans l’inflammation chronique, l’auto-immunité et le remodelage immunitaire associé aux tumeurs, faisant de *Mif* une cible fréquente d’études mécanistiques en immunologie et en biologie du cancer.
MIF Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Mif dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Mif. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Mif. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Mif.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.