Plasmide Double Nickase (h) MIF: sc-400574-NIC

Le facteur inhibiteur de la migration des macrophages (MIF) est une cytokine pléiotrope et une protéine enzymatique qui régule les réponses immunitaires innée et adaptative en modulant l'activation des macrophages, le trafic des leucocytes et la production de médiateurs inflammatoires. Il s'interface avec une signalisation dépendante de récepteurs via CD74 et des récepteurs de chimiokines tels que CXCR2/CXCR4/CXCR7, activant en aval les voies MAPK et NF-κB qui orientent la libération de cytokines, la survie cellulaire et les réponses au stress. Le MIF contribue également à l'homéostasie redox et peut influencer le contrôle du cycle cellulaire et l'apoptose, reliant les signaux inflammatoires à des programmes cellulaires plus larges. Une dérégulation de la signalisation du MIF a été associée à des maladies inflammatoires chroniques, à des phénotypes auto-immuns et à l'inflammation associée aux tumeurs, ce qui en fait une cible fréquente d'études mécanistiques en immunologie et en biologie du cancer.

MIF Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus MIF dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de MIF. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de MIF. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de MIF.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.