Plasmide CRISPR d'Activation (m) MIF: sc-421649-ACT

Le facteur inhibiteur de la migration des macrophages (MIF), codé chez la souris par le gène *Mif*, est une protéine pléiotrope de type cytokine qui coordonne les réponses immunitaires innées et adaptatives en modulant l’activation des macrophages, le recrutement des leucocytes et la production de médiateurs inflammatoires. Le MIF s’interface avec des voies de signalisation clés, notamment MAPK/ERK et PI3K/AKT, et peut influencer des programmes transcriptionnels dépendants de NF-κB, façonnant les réponses au stress cellulaire et la survie. Par ses interactions avec des récepteurs tels que CD74 et des récepteurs de chimiokines, le MIF soutient la chimiotaxie et les échanges inflammatoires au sein des microenvironnements tissulaires. Une expression dérégulée de MIF a été associée à l’inflammation chronique et à des pathologies d’origine immunitaire, et il est fréquemment étudié dans le contexte de l’inflammation associée aux tumeurs, de la dérégulation métabolique et de réseaux de signalisation impliqués dans la fibrose.

MIF Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Mif sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MIF Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Mif dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Mif, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MIF. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Mif natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MIF au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MIF dans les cellules tumorales présentant une expression de Mif silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.