MIB1 Plasmide Double Nickase (h): sc-404769-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- MIB1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il MIB1 Double Nickase Plasmid (h) e il MIB1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira MIB1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: MIB1 Antibody (D-6): sc-393551
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
MIB1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-404769-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MIB1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404769-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MIB1 codifica mindbomb E3 ubiquitin protein ligase 1, una ligasi E3 dell’ubiquitina di tipo RING che ubiquitina ligandi di Notch come DLL1 e JAG1 per promuovere l’endocitosi del ligando e una corretta attivazione produttiva del recettore Notch. Regolando ampiezza e tempistica della segnalazione Notch, MIB1 influenza le decisioni sul destino cellulare, la differenziazione e il patterning tissutale, con effetti a valle su programmi trascrizionali che controllano proliferazione e impegno di linea. MIB1 interagisce inoltre con l’omeostasi del sistema ubiquitina–proteasoma e con vie di traffico endocitico che modellano le dinamiche recettore–ligando sulla superficie cellulare. Alterazioni genetiche e funzionali di MIB1 sono state associate a una segnalazione dello sviluppo modificata e a fenotipi rilevanti per la malattia, inclusi contesti in cui la deregolazione della via di Notch contribuisce alla biologia oncogenica e cardiovascolare.
MIB1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus MIB1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di MIB1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di MIB1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con MIB1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.