Plasmide CRISPR d'Activation (h) MIB1: sc-404769-ACT

Le gène humain **MIB1** code la ligase E3 d’ubiquitine *mindbomb 1*, une ligase E3 qui favorise l’ubiquitination et l’endocytose des ligands de Notch tels que **JAG1** et les protéines **DLL**, permettant ainsi une activation efficace du récepteur Notch. En régulant le trafic des ligands et la compétence de signalisation récepteur–ligand, **MIB1** influence les décisions de destin cellulaire, la différenciation et la mise en place des tissus dans des contextes développementaux comme homéostatiques. L’activité de **MIB1** s’articule avec la protéostasie dépendante de l’ubiquitine et les voies de tri endocytique, modulant les sorties transcriptionnelles en aval de la signalisation Notch. Un dysfonctionnement de l’axe **MIB1/Notch** a été associé à des altérations de la neurogenèse, à des phénotypes du développement cardiovasculaire et à des états de signalisation oncogénique, ce qui motive des études mécanistiques dans divers modèles cellulaires.

MIB1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MIB1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MIB1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MIB1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MIB1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MIB1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MIB1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MIB1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MIB1 dans les cellules tumorales présentant une expression de MIB1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.