MIA2 Plasmide Double Nickase (h): sc-418205-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- MIA2 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il MIA2 Double Nickase Plasmid (h) e il MIA2 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira MIA2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
MIA2 Plasmide Double Nickase (h) | sc-418205-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MIA2 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-418205-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MIA2 (melanoma inhibitory activity family member 2) codifica una grande proteina della via secretoria, arricchita nel reticolo endoplasmatico e nell’apparato di Golgi, che supporta il traffico intracellulare e la secrezione di specifiche proteine cargo. È implicata nell’omeostasi del RE e nel processamento proteico, collegando l’attività di MIA2 a vie quali le risposte allo stress del RE, il trasporto mediato da vescicole e la regolazione della segnalazione associata alla matrice extracellulare. Un’alterata espressione di MIA2 è stata riportata in diverse neoplasie e patologie epatiche, coerentemente con ruoli nella differenziazione delle cellule tumorali, in cambiamenti del secretoma legati all’invasione e nel rimodellamento del tessuto epatico. Queste caratteristiche rendono MIA2 un bersaglio utile per studiare la regolazione delle reti secretorie e come i difetti di traffico influenzino i fenotipi cellulari.
MIA2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus MIA2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di MIA2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di MIA2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con MIA2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.