Plasmide Double Nickase (h) Mi2-b: sc-402185-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Mi2-b correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Mi2-b Double Nickase (h) et le plasmide Mi2-b Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant CHD4. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Mi2-β Antibody (H-7): sc-393647
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Mi2-b | sc-402185-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Mi2-b | sc-402185-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CHD4 (Mi2-β) est un remodeler de la chromatine dépendant de l’ATP et une sous-unité centrale du complexe NuRD (remodelage des nucléosomes et désacétylation) qui couple le glissement des nucléosomes à la désacétylation des histones afin de réguler la répression transcriptionnelle et l’accessibilité de la chromatine. Il participe à la signalisation et à la réparation des dommages à l’ADN, aux réponses au stress de réplication et au maintien de la stabilité du génome grâce à un contrôle coordonné de la structure de la chromatine. Mi2-β influence la spécification des lignages et la progression du cycle cellulaire en façonnant l’état des enhancers et des promoteurs au sein de réseaux de gènes régulés au cours du développement. Une altération de la fonction de CHD4/NuRD a été associée à des programmes épigénétiques dérégulés observés en biologie du cancer ainsi qu’à des phénotypes neurodéveloppementaux mis en évidence dans des études génétiques.
Mi2-b Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CHD4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CHD4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CHD4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CHD4.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.