Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plasmide CRISPR/Cas9 KO mHMGCS (h): sc-403941
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- mHMGCS Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique mHMGCS, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: mHMGCS Antibody (B-8): sc-393256
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO mHMGCS (h) | sc-403941 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
HMGCS2 code la 3‑hydroxy‑3‑méthylglutaryl‑CoA synthase mitochondriale (mHMGCS), l’enzyme limitante de la cétogenèse qui catalyse la formation de HMG‑CoA à partir d’acétoacétyl‑CoA et d’acétyl‑CoA. Elle relie la β‑oxydation hépatique des acides gras à la production de corps cétoniques en période de jeûne et de stress métabolique, influençant l’homéostasie énergétique mitochondriale et l’équilibre rédox. L’activité de HMGCS2 s’intègre à des programmes transcriptionnels pilotés par PPARα et à des voies de détection des nutriments qui coordonnent l’utilisation des lipides, le flux gluconéogénique et le métabolisme oxydatif. La dysrégulation de HMGCS2 a été associée à des erreurs innées de la synthèse des corps cétoniques ainsi qu’à des phénotypes métaboliques altérés observés dans des études sur les maladies hépatiques et le métabolisme du cancer.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO mHMGCS (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène HMGCS2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du HMGCS2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert HMGCS2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine mHMGCS.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en HMGCS2 pour l'étude de la signalisation de mHMGCS, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de HMGCS2 essentiels à la fonction de mHMGCS
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de HMGCS2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le mHMGCS plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le mHMGCS plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus HMGCS2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le mHMGCS plasmide HDR (h) et le mHMGCS (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie HMGCS2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles HMGCS2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.