Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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MGMT Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400720-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- MGMTO plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase MGMT (h) e o Plasmídeo Double Nickase MGMT (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para MGMT. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:MGMT Anticorpo (E-1): sc-166528
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
MGMT Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-400720-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MGMT Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-400720-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
A O6-metilguanina-DNA metiltransferase (MGMT) é uma enzima de reparo direto do DNA que remove adutos alquila da posição O6 da guanina ao transferir a lesão para uma cisteína no sítio ativo, em uma reação “suicida” de uso único. Essa atividade protege a integridade genômica ao prevenir erros de pareamento e quebras de dupla fita associadas à replicação, que podem surgir de lesões persistentes de O6-alquilguanina. A MGMT atua no contexto mais amplo da rede de resposta e reparo a danos no DNA, que se interliga ao estresse replicativo e ao processamento dependente de reparo de pareamentos incorretos (mismatch repair) de danos por alquilação. A expressão alterada de MGMT ou a metilação de seu promotor é amplamente estudada como determinante das respostas celulares ao dano por agentes alquilantes e é relevante para a biologia tumoral, assinaturas mutacionais e a comunicação cruzada entre vias de reparo do DNA.
MGMT O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus MGMT em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de MGMT. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função MGMT. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com MGMT interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.