mGluR-8a/b/c Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420695

Descripción general

Grm8 codifica el receptor metabotrópico de glutamato 8 (mGluR-8a/b/c), un GPCR del grupo III que se acopla principalmente a proteínas Gi/o para reducir la actividad de la adenilato ciclasa, modular la señalización de cAMP/PKA y regular la liberación presináptica de neurotransmisores. La actividad de mGluR8 influye en la transmisión y la plasticidad sinápticas al ajustar la función de los canales iónicos y la probabilidad de liberación de vesículas, integrando la señalización glutamatérgica a través de los circuitos neuronales. En el ratón, Grm8 se estudia en el contexto del equilibrio excitatorio/inhibitorio y de mecanismos a nivel de circuito que moldean el procesamiento sensorial, el aprendizaje y las conductas relacionadas con la respuesta al estrés. La señalización desregulada de receptores de glutamato, incluidos los mGluR del grupo III, se investiga con frecuencia por su contribución a fenotipos del neurodesarrollo y neuropsiquiátricos en modelos experimentales.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO mGluR-8a/b/c (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Grm8 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Grm8 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Grm8 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína mGluR-8a/b/c.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Grm8 para la investigación de la señalización de mGluR-8a/b/c, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Grm8 críticos para la función de mGluR-8a/b/c
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Grm8 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido mGluR-8a/b/c CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido mGluR-8a/b/c CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Grm8. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR mGluR-8a/b/c (m) y el plásmido HDR mGluR-8a/b/c (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Grm8 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Grm8 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.