Plasmide CRISPR/Cas9 KO MGC29506 (h): sc-406694

Présentation

MZB1 (également connu sous le nom de MGC29506) code une protéine luminale du réticulum endoplasmique, enrichie dans les cellules de la lignée B, qui soutient la différenciation en plasmocytes et la biosynthèse des immunoglobulines. Elle agit comme co-chaperon au sein du réseau de protéostasie du RE, en coordonnant le repliement oxydatif et le contrôle qualité via des interactions avec les systèmes de chaperons GRP94/HSP90B1 et BiP/HSPA5, et en contribuant à la signalisation du stress du RE et de la réponse aux protéines mal repliées (UPR). En modulant la capacité de la voie sécrétoire et la prise en charge des protéines mal conformées, MZB1 influence les programmes de sécrétion d’anticorps et l’homéostasie des cellules B. Une expression dérégulée a été associée à des états plasmocytaires aberrants et à une physiopathologie liée au système immunitaire, ce qui en fait une cible pertinente pour les études sur la maturation des cellules B, l’adaptation au stress du RE et la biologie des cellules sécrétrices.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MGC29506 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MZB1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MZB1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MZB1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MGC29506.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MZB1 pour l'étude de la signalisation de MGC29506, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MZB1 essentiels à la fonction de MGC29506
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MZB1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le MGC29506 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le MGC29506 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MZB1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le MGC29506 plasmide HDR (h) et le MGC29506 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MZB1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MZB1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.