Plasmide CRISPR d'Activation (h) MGAT2: sc-406205-ACT

Le gène humain **MOGAT2** code **MGAT2** (monoacylglycérol O-acyltransférase 2), une enzyme membranaire du réticulum endoplasmique qui catalyse la conversion du monoacylglycérol et de l’acyl-CoA en diacylglycérol, un intermédiaire clé de la synthèse des triacylglycérols. Cette activité relie l’assimilation des lipides alimentaires et le stockage lipidique cellulaire à des voies plus larges d’homéostasie des glycérolipides et de l’énergie, en influençant la formation des gouttelettes lipidiques et la composition des lipides membranaires. Le flux dépendant de MGAT2 peut moduler la signalisation en aval via des médiateurs lipidiques dérivés du diacylglycérol et s’inscrire dans des programmes métaboliques qui façonnent la gestion des lipides dans le tissu adipeux et le foie. Une régulation altérée de **MOGAT2/MGAT2** a été associée à des phénotypes métaboliques impliquant la dyslipidémie, la sensibilité à l’insuline et des processus liés à la stéatose hépatique, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques de la physiopathologie induite par les lipides.

MGAT2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MOGAT2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MGAT2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MOGAT2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MOGAT2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MGAT2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MOGAT2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MGAT2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MGAT2 dans les cellules tumorales présentant une expression de MOGAT2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.