Plasmide Double Nickase (m) MFSD2: sc-429366-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) MFSD2 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide MFSD2 Double Nickase (m) et le plasmide MFSD2 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Mfsd2a. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) MFSD2 | sc-429366-NIC | 20 µg | $410.00 |
Mfsd2a code la protéine MFSD2, un transporteur membranaire multipasse de la superfamille des « major facilitator » (MFS), fortement enrichi dans les barrières endothéliales et contribuant au transport des lipides et des nutriments à travers des interfaces vasculaires spécialisées. Chez la souris, MFSD2A est surtout connue pour réguler la transcytose dans l’endothélium microvasculaire cérébral, soutenant l’intégrité de la barrière hémato-encéphalique et influençant l’homéostasie du SNC. Par son rôle dans le transport membranaire et le contrôle du trafic vésiculaire, MFSD2A affecte des voies du métabolisme lipidique et des fonctions de barrière cellulaire pertinentes dans des modèles de neurodéveloppement et de neuroinflammation. Une activité altérée de MFSD2A a été associée à des phénotypes de dysfonction de barrière et à des mécanismes de maladies neurologiques, ce qui en fait une cible utile pour étudier la biologie du transport endothélial et la régulation métabolique pertinente pour le SNC.
MFSD2 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Mfsd2a dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Mfsd2a. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Mfsd2a. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Mfsd2a.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.