Plasmide CRISPR/Cas9 KO MFSD2 (m): sc-429366

Présentation

Mfsd2a code pour MFSD2, un transporteur de la superfamille des « major facilitator » impliqué dans la gestion des lipides et l’homéostasie membranaire, dont les rôles dans la biologie endothéliale et la physiologie des tissus nerveux sont bien établis. Au niveau de la barrière hémato-encéphalique, MFSD2 contribue à la régulation de la transcytose et influence l’apport de lysophospholipides tels que des acides gras oméga‑3 liés à la LPC, affectant ainsi l’intégrité de l’unité neurovasculaire et la fonction neuronale. Une activité altérée de MFSD2A a été associée à une perturbation des propriétés de la barrière, à des phénotypes neurodéveloppementaux et à des modifications de la signalisation inflammatoire liées à un stress endothélial et métabolique. Dans des modèles murins, Mfsd2a constitue un point d’entrée exploitable pour étudier la signalisation couplée au transport des lipides, le contrôle de la perméabilité vasculaire et l’adaptation métabolique spécifique des tissus.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MFSD2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Mfsd2a dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Mfsd2a, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Mfsd2a à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MFSD2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Mfsd2a pour l'étude de la signalisation de MFSD2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Mfsd2a essentiels à la fonction de MFSD2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Mfsd2a pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le MFSD2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le MFSD2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Mfsd2a. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le MFSD2 plasmide HDR (m) et le MFSD2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Mfsd2a pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Mfsd2a définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.