Plasmide CRISPR d'Activation (h) MFSD2: sc-405672-ACT

MFSD2A code MFSD2, un transporteur de lysophosphatidylcholines dépendant du sodium qui assure l’absorption de l’acide docosahexaénoïque (DHA) à travers les barrières endothéliales, avec un rôle majeur au niveau de la barrière hémato-encéphalique. En régulant l’entrée des lipides et la composition des phospholipides membranaires, MFSD2A soutient le neurodéveloppement, le maintien des neurones et l’intégrité de la barrière, tout en s’intégrant à des voies plus larges de transport lipidique et d’homéostasie métabolique. MFSD2A contribue également à la suppression de la transcytose vésiculaire dans l’endothélium cérébral, reliant ainsi son activité au contrôle du trafic endothélial et au maintien d’une barrière étanche. Des altérations de l’expression ou de la fonction de MFSD2A ont été associées à des phénotypes neurodéveloppementaux et à une perméabilité de barrière dérégulée, ce qui en fait une cible pertinente pour les études du métabolisme lipidique du SNC et de la biologie endothéliale.

MFSD2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MFSD2A sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MFSD2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MFSD2A dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MFSD2A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MFSD2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MFSD2A natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MFSD2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MFSD2 dans les cellules tumorales présentant une expression de MFSD2A silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.