Plasmide Double Nickase (m) Mfn1/Mitofusin 1: sc-426545-NIC

Mfn1 chez la souris code la mitofusine 1, une GTPase apparentée à la dynamine, intégrée à la membrane externe des mitochondries, qui assure l’arrimage et la fusion mitochondriale. MFN1 coordonne l’architecture du réseau mitochondrial, soutient l’efficacité de la phosphorylation oxydative et contribue au maintien de l’ADN mitochondrial ainsi qu’à l’adaptation au stress via les voies de dynamique mitochondriale. Son activité recoupe des processus de contrôle qualité tels que la mitophagie et la signalisation apoptotique, en influençant le potentiel de membrane, l’organisation des crêtes et la communication entre organites. La dérégulation de la fusion dépendante de MFN1 est associée à des altérations de la bioénergétique et est fréquemment étudiée dans le contexte de la neurodégénérescence, des dysfonctions cardiométaboliques et des transitions d’état des cellules cancéreuses, où le remodelage mitochondrial impacte le phénotype.

Mfn1/Mitofusin 1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Mfn1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Mfn1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Mfn1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Mfn1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.