Plasmide CRISPR/Cas9 KO METTL5 (h): sc-418556

Présentation

METTL5 code une méthyltransférase d’ARN dépendante de la SAM, qui catalyse le dépôt de N6‑méthyladénosine (m6A) sur l’ARNr 18S, contribuant à façonner la structure du ribosome et le rendement de la traduction. Cette modification est liée à la biogenèse des ribosomes et à l’ajustement fin des programmes de synthèse protéique qui soutiennent la croissance cellulaire et l’adaptation au stress. Une dérégulation de la machinerie de méthylation de l’ARNr, y compris de l’activité de METTL5, a été associée à des changements du contrôle traductionnel observés dans des phénotypes neurodéveloppementaux et dans des états d’expression génique liés au cancer. Ainsi, METTL5 est étudiée dans des voies reliant l’épigénétique de l’ARN à la protéostasie, à la progression du cycle cellulaire et à la différenciation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO METTL5 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène METTL5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du METTL5, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert METTL5 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine METTL5.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en METTL5 pour l'étude de la signalisation de METTL5, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de METTL5 essentiels à la fonction de METTL5
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de METTL5 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le METTL5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le METTL5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus METTL5. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le METTL5 plasmide HDR (h) et le METTL5 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie METTL5 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles METTL5 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.