Plasmide Double Nickase (h) METTL3: sc-404029-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) METTL3 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide METTL3 Double Nickase (h) et le plasmide METTL3 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant METTL3. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: METTL3 Antibody (D-9): sc-518180
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) METTL3 | sc-404029-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) METTL3 | sc-404029-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
METTL3 code le cœur catalytique du complexe de méthyltransférase de la N6‑méthyladénosine (m6A) de l’ARNm ; il agit en partenariat avec METTL14 et des cofacteurs tels que WTAP pour déposer des marques m6A sur des ARN codants et non codants. Cette modification de l’ARN influence la stabilité des transcrits, l’épissage, l’export nucléaire et la traduction, façonnant ainsi des programmes liés au contrôle du cycle cellulaire, à la différenciation, aux réponses au stress et à la signalisation de l’immunité innée. La régulation m6A dépendante de METTL3 s’articule avec les voies du métabolisme de l’ARN et le contrôle épitranscriptomique de l’expression génique, notamment en modulant des sorties de signalisation telles que les réseaux MAPK, PI3K–AKT et de réponse aux dommages de l’ADN via une altération du devenir des ARNm. Une activité dérégulée de METTL3 a été associée à divers phénotypes pertinents pour la maladie en biologie du cancer, en hématopoïèse et dans des contextes inflammatoires, ce qui en fait une cible fréquente des études mécanistiques sur la régulation basée sur l’ARN.
METTL3 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus METTL3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de METTL3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de METTL3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de METTL3.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.