METTL14 Double Nickase Plasmid (h): sc-406936-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das METTL14 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- METTL14 Double-Nickase-Plasmid (h) und METTL14 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf METTL14 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
METTL14 Double Nickase Plasmid (h) | sc-406936-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
METTL14 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-406936-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
METTL14 kodiert eine zentrale Komponente des N6‑Methyladenosin-(m6A)-RNA‑Methyltransferase‑„Writer“-Komplexes und arbeitet dabei mit METTL3 sowie Adapterproteinen wie WTAP zusammen, um m6A‑Markierungen auf mRNA und anderen RNAs zu setzen. Diese epitranskriptomischen Modifikationen regulieren RNA‑Spleißen, nukleären Export, Stabilität und Translation und prägen dadurch Genexpressionsprogramme, die Zellschicksalsentscheidungen, Proliferation und Stressantworten steuern. METTL14‑abhängige m6A‑Signalgebung überschneidet sich mit Signalwegen, die DNA‑Schadensantworten, Stammzell‑Eigenschaften („Stemness“) und die Regulation der angeborenen Immunität kontrollieren, indem sich Transkriptumsatz und translationaler Output verändern. Eine fehlregulierte METTL14‑Aktivität oder ‑Expression wurde mit einer aberranten, epigenetikähnlichen Kontrolle onkogener und entwicklungsbiologischer Netzwerke in Verbindung gebracht und ist daher ein häufiges Ziel mechanistischer Studien zur Tumorbiologie und Differenzierung.
METTL14 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des METTL14-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von METTL14 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die METTL14-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit METTL14-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.