METT10D Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-408605

Descripción general

El gen humano **METTL16 (METT10D)** codifica una metiltransferasa de ARN dependiente de **S-adenosil-L-metionina** que instala **N6-metiladenosina (m6A)** en sustratos de ARN con estructura, vinculando la modificación del ARN con el control del metabolismo del ARN. La metilación mediada por METTL16 puede influir en el empalme del pre-ARNm, la estabilidad del ARN y la traducción mediante efectos sobre la estructura del ARN y el ensamblaje de ribonucleoproteínas, y se ha relacionado con la regulación de la homeostasis celular de donadores de metilo a través del procesamiento del transcrito **MAT2A**. A través de estas funciones, METTL16 participa en programas de expresión génica que moldean el crecimiento celular y la adaptación al estrés, lo que lo hace relevante para estudios de regulación epitranscriptómica en contextos de desarrollo y enfermedad. La alteración de la actividad de METTL16 se ha implicado en un procesamiento del ARN desregulado y en fenotipos de señalización proliferativa observados en múltiples modelos de investigación oncológica y neurobiológica.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO METT10D (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen METTL16 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del METTL16 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de METTL16 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína METT10D.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en METTL16 para la investigación de la señalización de METT10D, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de METTL16 críticos para la función de METT10D
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de METTL16 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido METT10D CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido METT10D CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus METTL16. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR METT10D (h) y el plásmido HDR METT10D (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología METTL16 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana METTL16 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.