Plasmide Double Nickase (h) MetRS: sc-402763-NIC

Le gène humain **MARS** code la méthionyl‑ARNt synthétase (MetRS), une aminoacyl‑ARNt synthétase cytosolique qui charge l’ARNt^Met en méthionine afin d’initier et de maintenir la synthèse protéique. MetRS agit au cœur du contrôle traductionnel et soutient la protéostasie cellulaire, reliant la disponibilité des nutriments et les réponses au stress à la traduction globale des ARNm. En tant que composant du complexe multi‑aminoacyl‑ARNt synthétases, MetRS contribue à une régulation coordonnée de la traduction et de processus de signalisation qui influencent la prolifération et la différenciation. Une dérégulation de l’expression de **MARS** ou de l’activité de MetRS a été associée à une capacité de traduction altérée observée dans des contextes de cancer ainsi que de maladies neurodéveloppementales et neurodégénératives, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques sur le maintien du protéome.

MetRS Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus MARS dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de MARS. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de MARS. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de MARS.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.