Plasmide CRISPR d'Activation (m) Met: sc-421635-ACT

Met murin code un récepteur tyrosine kinase du facteur de croissance des hépatocytes (HGF) qui régule la prolifération, la survie et la motilité des cellules épithéliales et endothéliales via les voies de signalisation MAPK/ERK, PI3K–AKT, STAT et de la famille Rho. La signalisation MET coordonne des programmes de croissance invasive, le remodelage du cytosquelette et les interactions cellule–cellule au cours du développement embryonnaire et de la réparation tissulaire. Une activité MET dérégulée est impliquée dans des réseaux de signalisation oncogéniques, la dissémination métastatique et une communication tumeur–stroma altérée ; elle recoupe également des voies pertinentes pour la fibrose et les microenvironnements inflammatoires. Dans les systèmes expérimentaux, Met constitue un nœud clé pour étudier la dynamique d’activation du récepteur, les cascades de phosphorylation en aval et les programmes transcriptionnels qui contrôlent la migration et la morphogenèse.

Met Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Met sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Met Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Met dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Met, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Met. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Met natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Met au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Met dans les cellules tumorales présentant une expression de Met silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.