Plasmide CRISPR d'Activation (h) MESP1: sc-404176-ACT

MESP1 (facteur de transcription basique hélice-boucle-hélice du mésoderme postérieur 1) est un régulateur maître de la spécification précoce du mésendoderme et de l’engagement vers la lignée cardiovasculaire au cours du développement humain. En tant que facteur de transcription bHLH, MESP1 coordonne des programmes transcriptionnels qui gouvernent les décisions de destinée cellulaire associées à la gastrulation, la transition épithélio-mésenchymateuse et la migration des progéniteurs, en agissant en amont de réseaux qui organisent le mésoderme et initient la cardiogenèse. Une activité de MESP1 dérégulée peut perturber les trajectoires de différenciation et a été impliquée dans des anomalies du développement ainsi que dans une plasticité de lignée altérée, pertinentes pour la biologie des cardiopathies congénitales et la modélisation de maladies à partir de cellules souches. In vitro, la modulation contrôlée de MESP1 soutient les études mécanistiques des réseaux de régulation génique du développement précoce et les protocoles de différenciation vers des types cellulaires dérivés du mésoderme.

MESP1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MESP1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MESP1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MESP1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MESP1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MESP1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MESP1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MESP1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MESP1 dans les cellules tumorales présentant une expression de MESP1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.