Plasmide CRISPR d'Activation (h) Mer: sc-402654-ACT

Le gène humain **RYK** (*related to tyrosine kinase*) code une protéine de type récepteur à activité tyrosine kinase dont l’activité catalytique est altérée, et qui fonctionne comme co‑récepteur dans la signalisation Wnt, en particulier dans les voies Wnt non canoniques de polarité planaire cellulaire. Par des interactions ligand‑récepteur avec **WNT5A** et des signaux apparentés, RYK module la dynamique du cytosquelette, la polarité cellulaire et le comportement migratoire, influençant la mise en place des tissus ainsi que les programmes de guidage neuronal. Une expression ou une signalisation de RYK altérée a été associée à une dérégulation de processus développementaux et à des phénotypes pertinents pour l’invasion oncogénique et la biologie des métastases. Ces propriétés font de RYK un nœud utile pour disséquer, dans des modèles cellulaires humains, le câblage contextuel des voies Wnt et les transitions d’état cellulaire.

RYK Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de RYK sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

RYK Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus RYK dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription RYK, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de RYK. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus RYK natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de RYK au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie RYK dans les cellules tumorales présentant une expression de RYK silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.