Plasmide CRISPR/Cas9 KO Menin (h): sc-402759

Présentation

MEN1 code la ménine, une protéine d’échafaudage principalement nucléaire qui coordonne la régulation transcriptionnelle et l’état de la chromatine via des interactions avec des modificateurs d’histones et des facteurs de transcription spécifiques de séquence. La ménine est étroitement liée au contrôle épigénétique de programmes d’expression génique régissant la progression du cycle cellulaire, la différenciation et la stabilité du génome, notamment des voies associées aux complexes MLL/COMPASS et à d’autres régulateurs liés à la chromatine. La perturbation de MEN1 dérègle l’homéostasie des lignées endocrines et des réseaux transcriptionnels impliqués dans la biologie des gènes suppresseurs de tumeurs. En tant que régulateur dépendant du contexte, la ménine est largement étudiée pour ses effets sur les tissus producteurs d’hormones, les réponses aux dommages de l’ADN et la fidélité transcriptionnelle.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Menin (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MEN1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MEN1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MEN1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Menin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MEN1 pour l'étude de la signalisation de Menin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MEN1 essentiels à la fonction de Menin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MEN1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Menin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Menin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MEN1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Menin plasmide HDR (h) et le Menin (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MEN1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MEN1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.