Plasmide CRISPR d'Activation (h) Mel-CAM: sc-401020-ACT

MCAM code pour Mel-CAM (CD146), une molécule d’adhérence de la superfamille des immunoglobulines exprimée à la surface cellulaire, qui régule les interactions cellule–cellule, la dynamique des jonctions endothéliales et le remodelage du cytosquelette. Dans les tissus humains, Mel-CAM intervient dans des processus liés à la biologie vasculaire, notamment l’activation endothéliale, la migration cellulaire et la signalisation angiogénique, et peut interagir avec des voies qui contrôlent la signalisation dépendante de l’adhérence et la perméabilité. Une expression altérée de MCAM a été rapportée dans de multiples contextes pathologiques, où elle est fréquemment étudiée en lien avec l’invasivité des cellules tumorales, le comportement métastatique et le remodelage inflammatoire de la vasculature. Ces caractéristiques font de MCAM une cible utile pour disséquer les mécanismes d’adhérence, de motilité et de dialogue avec le microenvironnement dans des modèles cellulaires pertinents.

Mel-CAM Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MCAM sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Mel-CAM Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MCAM dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MCAM, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Mel-CAM. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MCAM natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Mel-CAM au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Mel-CAM dans les cellules tumorales présentant une expression de MCAM silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.