Plasmide CRISPR d'Activation (h) Mel-18: sc-401776-ACT

PCGF2 code pour Mel-18, une protéine à doigt RING du groupe Polycomb qui agit au sein du complexe répressif Polycomb 1 (PRC1) canonique pour instaurer et maintenir des programmes de répression transcriptionnelle. Via la compaction de la chromatine médiée par PRC1 et en coopération avec la triméthylation de H3K27 dépendante de PRC2, Mel-18 contribue au contrôle épigénétique de la spécification des lignages, de l’autorenouvellement des cellules souches et de la régulation du cycle cellulaire. PCGF2 a été associé à la régulation de l’expression des gènes HOX et d’autres loci du développement, et une activité Polycomb altérée est fréquemment liée à une prolifération et à des états de différenciation aberrants dans le cancer et d’autres maladies. Parce que Mel-18 module l’accessibilité de la chromatine et la mémoire transcriptionnelle, PCGF2 est largement étudié dans le cadre de la dynamique de l’épigénome, de la reprogrammation oncogénique et des modèles de biologie du développement.

Mel-18 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PCGF2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Mel-18 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PCGF2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PCGF2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Mel-18. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PCGF2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Mel-18 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Mel-18 dans les cellules tumorales présentant une expression de PCGF2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.