Plasmide CRISPR/Cas9 KO MEK-7 (h): sc-402363

Présentation

MAP2K7 code MEK-7 (MKK7), une MAP kinase kinase à double spécificité qui phosphoryle et active de manière sélective JNK (MAPK8/9/10) en réponse à des cytokines inflammatoires, au stress oxydatif et à des signaux génotoxiques. MEK-7 agit au sein de la cascade MAPK/JNK pour réguler des programmes transcriptionnels contrôlant l’apoptose, la différenciation, la production de cytokines et le remodelage du cytosquelette. Grâce à des interactions (crosstalk) avec des MAP3K en amont (p. ex., TAK1/MAP3K7, MEKK) et des facteurs en aval de la famille AP-1, MAP2K7 contribue à façonner les réponses adaptatives au stress et les sorties de signalisation de l’immunité innée. Une signalisation MAP2K7–JNK dérégulée a été associée à des réponses inflammatoires altérées et a été étudiée dans des contextes incluant la biologie du cancer, la neurodégénérescence et des modèles de stress métabolique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MEK-7 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MAP2K7 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MAP2K7, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MAP2K7 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MEK-7.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MAP2K7 pour l'étude de la signalisation de MEK-7, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MAP2K7 essentiels à la fonction de MEK-7
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MAP2K7 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le MEK-7 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le MEK-7 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MAP2K7. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le MEK-7 plasmide HDR (h) et le MEK-7 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MAP2K7 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MAP2K7 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.