Plasmide CRISPR d'Activation (h) MEK-7: sc-402363-ACT

Le gène humain MAP2K7 code MEK-7, une MAP kinase kinase à double spécificité qui phosphoryle et active préférentiellement JNK (MAPK8/9) en aval de MAP3K telles qu’ASK1 et TAK1. Cette kinase constitue un nœud clé de la signalisation activée par le stress, régulant des programmes transcriptionnels qui contrôlent l’apoptose, la production de cytokines, la différenciation et le remodelage du cytosquelette. L’activité de MEK-7 intègre les signaux inflammatoires et de stress oxydatif à l’expression génique dépendante d’AP-1, modulant ainsi les réponses immunitaires innées et la tolérance cellulaire au stress. Une dérégulation de la signalisation MAP2K7–JNK a été impliquée dans des mécanismes pertinents pour la plasticité des cellules cancéreuses, la neuroinflammation et la biologie du stress métabolique, ce qui en fait une cible utile pour la cartographie des voies et les études de perturbation.

MEK-7 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MAP2K7 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MEK-7 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MAP2K7 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MAP2K7, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MEK-7. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MAP2K7 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MEK-7 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MEK-7 dans les cellules tumorales présentant une expression de MAP2K7 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.