Plásmido CRISPR de Activación (h) Meis1: sc-401481-ACT

MEIS1 codifica un factor de transcripción homeobox TALE que forma complejos cooperativos con proteínas HOX y PBX para controlar la especificación de linajes, el mantenimiento de células madre y progenitoras hematopoyéticas, y el patrón del desarrollo. Meis1 modula programas transcripcionales vinculados al control del ciclo celular, la diferenciación y la regulación de la cromatina, incluidas vías que coordinan la autorrenovación y la maduración en linajes sanguíneos y neurales. La expresión desregulada de MEIS1 se estudia con frecuencia en el contexto de la leucemogénesis y de estados progenitores aberrantes, y los estudios de asociación genética implican redes reguladas por MEIS1 en la neurobiología y en rasgos relacionados con el sueño. Estas características hacen de MEIS1 un nodo útil para investigar circuitos transcripcionales, la lógica de los potenciadores y las decisiones de destino celular en modelos celulares humanos.

Meis1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MEIS1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Meis1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MEIS1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MEIS1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Meis1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MEIS1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Meis1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Meis1 en células tumorales con expresión de MEIS1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.