Plasmide Double Nickase (h) megalin/LRP2: sc-401094-NIC

LRP2 code la mégaline, un grand récepteur endocytaire de la famille des récepteurs des LDL, fortement exprimé à la surface des cellules épithéliales polarisées, et qui médie l’internalisation dépendante de la clathrine d’une grande diversité de ligands, notamment des transporteurs de vitamines, des lipoprotéines, des hormones et des complexes de signalisation. La mégaline coopère avec des protéines adaptatrices et des corécepteurs pour réguler l’endocytose médiée par récepteur, le trafic lysosomal, la gestion épithéliale des nutriments et l’homéostasie cellulaire dans le tubule proximal rénal et d’autres tissus absorbants. Par ses interactions avec des voies telles que le transport des rétinoïdes et de la vitamine D, la prise en charge de morphogènes apparentés à Sonic Hedgehog et la régulation de l’élimination des protéines extracellulaires, LRP2 influence des processus du développement et du métabolisme. Une perturbation génétique ou une dérégulation de LRP2 a été associée à des anomalies développementales syndromiques et à des phénotypes de dysfonction du tubule rénal, ce qui souligne son intérêt pour des études mécanistiques de la biologie épithéliale et de la signalisation endocytaire.

megalin/LRP2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus LRP2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de LRP2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de LRP2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de LRP2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.