MEF-2C Double Nickase Plasmid (m): sc-421620-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das MEF-2C Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- MEF-2C Double-Nickase-Plasmid (m) und MEF-2C Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Mef2c abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: MEF-2C: sc-518152
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
MEF-2C Double Nickase Plasmid (m) | sc-421620-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MEF-2C Double Nickase Plasmid (m2) | sc-421620-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Mef2c kodiert den Transkriptionsfaktor MEF-2C, einen Regulator der MADS-Box/MEF2-Familie, der Ca2+-abhängige Signalwege integriert, um linienspezifische Genprogramme zu steuern. MEF-2C koordiniert über Interaktionen mit Kofaktoren wie Klasse-IIa-HDACs sowie MAPK-/CaMK-abhängigen Signalwegen Chromatin- und Transkriptionsnetzwerke, die an der Myogenese, neuronalen Differenzierung und synaptischem Remodeling, der Entwicklung von Immunzellen und der Kardiogenese beteiligt sind. In Mausmodellen stört eine veränderte Mef2c-Dosierung oder -Aktivität die Entwicklungsmusterung und die aktivitätsabhängige Transkription, was MEF-2C für Studien zu neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen, kardialer Erregungsleitung und Remodeling sowie der hämatopoetischen Linienspezifikation relevant macht. Sein breites regulatorisches Spektrum verknüpft MEF-2C zudem mit Stressantwort- und Differenzierungsprogrammen, die in Primärzellen und aus Stammzellen abgeleiteten Systemen untersucht werden können.
MEF-2C Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Mef2c-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Mef2c abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Mef2c-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Mef2c-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.