Plásmido CRISPR de Activación (h) MEF-2C: sc-416594-ACT

MEF2C codifica el factor de transcripción humano MEF-2C, un regulador de la familia MADS-box/MEF2 que integra la señalización dependiente de calcio con el control de la cromatina y de la transcripción. MEF-2C coordina programas de expresión génica implicados en la diferenciación muscular, el desarrollo neuronal, la remodelación sináptica y la especificación de linajes de células inmunitarias mediante vías como CaMK/Calcineurina–NFAT, MAPK y sus interacciones con las HDAC de clase IIa. En el núcleo, MEF-2C se une a elementos de respuesta MEF2 para modular la transcripción dependiente de la actividad y las transiciones de estado celular en múltiples tejidos. La expresión desregulada de MEF2C o de su circuito regulador se ha asociado con fenotipos del neurodesarrollo, alteraciones del equilibrio excitatorio/inhibitorio y reprogramación transcripcional vinculada al cáncer, lo que respalda su uso como nodo para estudios mecanísticos.

MEF-2C El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MEF2C sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MEF-2C El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MEF2C en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MEF2C, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MEF-2C. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MEF2C y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MEF-2C en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MEF-2C en células tumorales con expresión de MEF2C silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.