Plasmide CRISPR d'Activation (h) MEF-2C: sc-416594-ACT

MEF2C code le facteur de transcription humain MEF-2C, un régulateur de la famille MADS-box/MEF2 qui intègre la signalisation dépendante du calcium au contrôle de la chromatine et de la transcription. MEF-2C coordonne des programmes d’expression génique impliqués dans la différenciation musculaire, le développement neuronal, le remodelage synaptique et la spécification des lignages de cellules immunitaires, via des voies telles que CaMK/Calcineurine–NFAT, MAPK, ainsi que par des interactions avec les HDAC de classe IIa. Dans le noyau, MEF-2C se lie à des éléments de réponse MEF2 afin de moduler la transcription dépendante de l’activité et les transitions d’état cellulaire dans de multiples tissus. Une expression dérégulée de MEF2C ou des circuits régulateurs associés a été liée à des phénotypes neurodéveloppementaux, à une modification de l’équilibre excitation/inhibition et à une reprogrammation transcriptionnelle associée au cancer, ce qui en fait un nœud pertinent pour des études mécanistiques.

MEF-2C Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MEF2C sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MEF-2C Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MEF2C dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MEF2C, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MEF-2C. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MEF2C natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MEF-2C au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MEF-2C dans les cellules tumorales présentant une expression de MEF2C silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.