Partículas Lentivirales de Activación (h) MEF-2A: sc-400484-LAC

MEF2A codifica el factor de transcripción MEF-2A, un regulador de la familia MADS-box/MEF2 que integra señales dependientes de calcio y entradas de MAPK para controlar programas génicos que gobiernan la miogénesis, la diferenciación neuronal, la remodelación sináptica y las respuestas celulares al estrés. La actividad de MEF-2A está modulada por modificaciones postraduccionales e interacciones con cofactores, lo que lo vincula con la remodelación de la cromatina y la transcripción dependiente de estímulos en linajes musculares, inmunitarios y neuronales. La alteración de la expresión de MEF2A o de su control regulatorio se ha asociado con la biología vascular y la función cardíaca, y la desregulación más amplia de la vía MEF2 se ha implicado en contextos del neurodesarrollo y la neurodegeneración. Como nodo en redes de transcripción dependientes de CREB/HDAC y de calcineurina, MEF-2A se estudia con frecuencia por su papel en la especificación de linaje, la adaptación metabólica y la expresión génica dependiente de la actividad.

Las partículas de activación lentiviral MEF-2A (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de MEF2A en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral MEF-2A (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción MEF2A, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de MEF-2A. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo MEF2A y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.