Plasmide Double Nickase (h) MEF-2A: sc-400484-NIC

MEF2A code le facteur amplificateur des myocytes 2A (MEF-2A), un facteur de transcription de la famille MADS-box/MEF2 qui intègre des signaux dépendants du calcium et des MAPK afin de réguler des programmes d'expression génique spécifiques de certains types cellulaires. MEF-2A participe à des réseaux transcriptionnels contrôlés par la chromatine et des cofacteurs en aval de voies telles que CaMK, calcineurine–NFAT, p38 MAPK et la répression par les HDAC de classe IIa, reliant des signaux extracellulaires à la différenciation, à la survie et aux réponses au stress. Il est largement impliqué dans la régulation de l'expression des gènes musculaires et neuronaux, ainsi que dans la transcription dépendante de l'activité. La dérégulation de la signalisation de MEF2A a été associée à des phénotypes cardiovasculaires et neurodéveloppementaux, ce qui en fait une cible utile pour explorer les circuits transcriptionnels dans des modèles cellulaires humains.

MEF-2A Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus MEF2A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de MEF2A. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de MEF2A. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de MEF2A.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.