Plasmide CRISPR d'Activation (h) MEF-2A: sc-400484-ACT

MEF2A code le facteur de transcription MEF-2A, membre de la famille des « myocyte enhancer factor 2 », qui se lie aux éléments MEF2 afin de réguler des programmes d’expression génique spécifiques des tissus. MEF-2A intègre la signalisation dépendante du calcium et les voies MAPK, en coordonnant des réponses transcriptionnelles qui influencent la myogenèse, la régulation de gènes dépendante de l’activité neuronale, ainsi que les fonctions vasculaires/endothéliales. Par ses interactions avec des cofacteurs tels que les HDAC de classe IIa, MEF-2A couple l’état de la chromatine à une transcription sensible aux stimuli et à la différenciation cellulaire. Des altérations de l’activité de MEF2A ont été associées à des phénotypes cardiovasculaires et neurodéveloppementaux, ce qui en fait un nœud pertinent pour des études mécanistiques du contrôle transcriptionnel dans des voies impliquées dans la maladie.

MEF-2A Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MEF2A sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MEF-2A Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MEF2A dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MEF2A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MEF-2A. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MEF2A natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MEF-2A au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MEF-2A dans les cellules tumorales présentant une expression de MEF2A silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.