Plasmide CRISPR d'Activation (h) Med6: sc-403204-ACT

Le gène humain **MED6** code **Med6**, une sous-unité essentielle du complexe **Mediator**, qui couple des facteurs de transcription spécifiques de séquence à l’ARN polymérase II afin de réguler l’initiation de la transcription. Med6 soutient l’assemblage et la fonction du complexe de pré-initiation et contribue à un contrôle étendu des programmes d’expression génique liés à la progression du cycle cellulaire, à la différenciation et à la signalisation en réponse au stress. En tant que co-régulateur transcriptionnel central, une perturbation de MED6 peut influencer des voies qui gouvernent la transcription dépendante de la chromatine et la stabilité globale du transcriptome. Une activité dérégulée de Mediator a été impliquée dans des réseaux transcriptionnels oncogéniques et d’autres troubles de l’expression des gènes, faisant de MED6 un nœud utile pour des études mécanistiques du contrôle transcriptionnel.

Med6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MED6 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Med6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MED6 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MED6, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Med6. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MED6 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Med6 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Med6 dans les cellules tumorales présentant une expression de MED6 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.