Plasmide CRISPR d'Activation (h) Med28: sc-407371-ACT

Le gène humain **MED28** code **Med28**, une sous-unité du complexe **Mediator** qui contribue à la transcription dépendante de l’ARN polymérase II et coordonne des programmes d’expression génique sensibles aux signaux. Med28 a été associée à la régulation de l’adhérence cellulaire et de la dynamique du cytosquelette via des interactions reliant le contrôle transcriptionnel à des voies telles que **MAPK/ERK** et la signalisation associée aux intégrines. Une expression altérée de **MED28** a été rapportée dans de multiples jeux de données liés au cancer et fait l’objet d’études pour son lien avec la prolifération, la migration et des états transcriptionnels d’adaptation au stress. En tant que co‑régulateur transcriptionnel, Med28 constitue un point d’entrée utile pour analyser le contrôle, dépendant de Mediator, des réseaux de gènes dans des modèles de développement et de maladie.

Med28 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MED28 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Med28 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MED28 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MED28, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Med28. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MED28 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Med28 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Med28 dans les cellules tumorales présentant une expression de MED28 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.