Plasmide Double Nickase (h) Med10: sc-407658-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Med10 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Med10 Double Nickase (h) et le plasmide Med10 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant MED10. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Med10 Antibody (C-2): sc-393450
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Med10 | sc-407658-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Med10 | sc-407658-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MED10 code une sous-unité du complexe Mediator, un coordinateur central de la transcription dépendante de l’ARN polymérase II, qui fait le lien entre les facteurs de transcription spécifiques de séquence et la machinerie transcriptionnelle de base. Med10 contribue à l’assemblage et à la stabilité des modules du Mediator qui régulent l’initiation de la transcription et les programmes d’expression génique dépendants des signaux. Par ces fonctions, MED10 influence de nombreux processus cellulaires, notamment la prolifération, la différenciation et les réseaux transcriptionnels sensibles au stress. La dérégulation des composants du Mediator est associée à un contrôle transcriptionnel altéré dans des troubles du développement ainsi qu’à des signatures d’expression génique liées au cancer, ce qui fait de MED10 un nœud pertinent pour des études mécanistiques de la régulation transcriptionnelle.
Med10 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus MED10 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de MED10. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de MED10. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de MED10.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.