Plásmido Doble Nickase (h) MDR1/ABCB1: sc-400178-NIC

ABCB1 (MDR1/P-glicoproteína) codifica un transportador de eflujo de la familia ABC (ATP-binding cassette) localizado predominantemente en la membrana plasmática, donde utiliza la hidrólisis de ATP para exportar una amplia variedad de xenobióticos y metabolitos endógenos. MDR1/ABCB1 contribuye a funciones de barrera epitelial y de protección tisular en órganos como el intestino, el hígado, el riñón y la barrera hematoencefálica, modulando la disposición intracelular de fármacos y las respuestas celulares al estrés. Su actividad se integra con vías de desintoxicación y farmacocinética, incluida la regulación coordinada con la señalización de receptores nucleares (p. ej., PXR, CAR) y con procesos de tráfico de membrana que controlan la abundancia del transportador en la superficie celular. La expresión o función desregulada de ABCB1 se estudia con frecuencia en el contexto de fenotipos de resistencia a múltiples fármacos en modelos de cáncer y de la variabilidad en la respuesta a medicamentos entre tejidos.

MDR1/ABCB1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ABCB1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ABCB1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ABCB1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ABCB1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.