Plásmido CRISPR de Activación (h) MDR1/ABCB1: sc-400178-ACT

ABCB1 (MDR1/P-glicoproteína) es un transportador de la familia de los casetes de unión a ATP (ABC) que exporta una amplia gama de xenobióticos y metabolitos endógenos a través de la membrana plasmática, modulando la acumulación intracelular de fármacos y la función de barrera. Se expresa de forma prominente en tejidos epiteliales y endoteliales, incluidos el intestino, el hígado, el riñón y la barrera hematoencefálica, donde contribuye a la desintoxicación y a la protección tisular. La actividad de MDR1/ABCB1 se relaciona con procesos farmacocinéticos y de respuesta al estrés al limitar la exposición a compuestos citotóxicos e influir en la homeostasis celular. La desregulación de la expresión de ABCB1 se ha vinculado ampliamente con fenotipos de resistencia a múltiples fármacos en modelos de cáncer y con la variabilidad en la respuesta a fármacos en contextos de enfermedades neurológicas e inflamatorias.

MDR1/ABCB1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ABCB1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MDR1/ABCB1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ABCB1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ABCB1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MDR1/ABCB1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ABCB1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MDR1/ABCB1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MDR1/ABCB1 en células tumorales con expresión de ABCB1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.