Plasmide CRISPR/Cas9 KO MDH2 (h): sc-402825

Présentation

MDH2 code la malate déshydrogénase mitochondriale 2, une enzyme clé dépendante du NAD⁺ qui catalyse la conversion réversible du malate en oxaloacétate dans le cycle de l’acide tricarboxylique (cycle de Krebs, TCA). En contrôlant la production mitochondriale de NADH et la disponibilité de l’oxaloacétate, MDH2 contribue à coordonner le métabolisme oxydatif, l’anaplérose et l’équilibre rédox, et soutient des flux biosynthétiques couplés à la respiration mitochondriale. La fonction de MDH2 est étroitement liée à la reprogrammation métabolique, à la gestion des espèces réactives de l’oxygène et aux voies de contrôle qualité mitochondriales qui déterminent l’aptitude cellulaire en situation de stress nutritionnel ou d’hypoxie. Une activité ou une expression altérée de MDH2 a été impliquée dans des phénotypes pertinents pour la maladie associés à un dysfonctionnement mitochondrial, notamment des déséquilibres neurométaboliques et des dépendances métaboliques associées aux tumeurs.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MDH2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MDH2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MDH2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MDH2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MDH2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MDH2 pour l'étude de la signalisation de MDH2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MDH2 essentiels à la fonction de MDH2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MDH2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le MDH2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le MDH2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MDH2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le MDH2 plasmide HDR (h) et le MDH2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MDH2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MDH2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.