Plasmide CRISPR/Cas9 KO MDFIC (m): sc-421259

Présentation

Le gène murin *Mdfic* code la protéine MDFIC, une protéine nucléaire de type inhibiteur de la famille MyoD, impliquée dans la régulation transcriptionnelle et la modulation de programmes d’expression génique spécifiques de lignée. Il a été rapporté que MDFIC influence l’activité des facteurs de transcription bHLH et qu’elle est liée au contrôle des états de différenciation cellulaire ainsi qu’aux programmes transcriptionnels associés à la prolifération. Par ces fonctions régulatrices, MDFIC peut interagir avec des voies qui gouvernent les réseaux géniques du développement et des réponses au stress ou à la croissance dépendantes du contexte. Une expression ou une fonction altérée de MDFIC a été associée dans la littérature à une dérégulation du contrôle transcriptionnel pertinente pour la biologie des cancers et certains phénotypes du développement, ce qui soutient son intérêt en tant que cible de recherche mécanistique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MDFIC (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Mdfic dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Mdfic, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Mdfic à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MDFIC.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Mdfic pour l'étude de la signalisation de MDFIC, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Mdfic essentiels à la fonction de MDFIC
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Mdfic pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le MDFIC plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le MDFIC plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Mdfic. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le MDFIC plasmide HDR (m) et le MDFIC (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Mdfic pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Mdfic définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.