MDA5 Plasmide Double Nickase (h): sc-401962-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- MDA5 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il MDA5 Double Nickase Plasmid (h) e il MDA5 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira IFIH1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
MDA5 Plasmide Double Nickase (h) | sc-401962-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MDA5 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401962-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
IFIH1 codifica la proteina 5 associata alla differenziazione del melanoma (MDA5), un’elicasi dell’RNA citosolica della famiglia DExD/H-box che rileva lunghi RNA a doppio filamento generati durante la replicazione virale. Dopo il legame con l’RNA, MDA5 segnala attraverso MAVS attivando IRF3/IRF7 e NF-κB, inducendo programmi di interferone di tipo I e di citochine proinfiammatorie che modellano le risposte immunitarie innate e adattative. Questa via si interseca con la restrizione antivirale, l’apoptosi e il rimodellamento immunometabolico, ed è strettamente regolata per prevenire un’anomala rilevazione di RNA “self”. Un’attività deregolata di IFIH1/MDA5 e della segnalazione dell’interferone è stata collegata a fenotipi autoinfiammatori e autoimmuni e può influenzare la segnalazione infiammatoria in contesti di infezione e di immunità correlata al cancro.
MDA5 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus IFIH1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di IFIH1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di IFIH1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con IFIH1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.