Plasmide Double Nickase (h) MDA5: sc-401962-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) MDA5 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide MDA5 Double Nickase (h) et le plasmide MDA5 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant IFIH1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) MDA5 | sc-401962-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) MDA5 | sc-401962-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
IFIH1 code la protéine 5 associée à la différenciation des mélanomes (MDA5), une hélicase ARN cytosolique de la famille DExD/H-box qui détecte les longs ARN double brin produits au cours de la réplication virale. Après liaison à l’ARN, MDA5 transmet un signal via MAVS pour activer IRF3/IRF7 et NF-κB, déclenchant des programmes d’interférons de type I et de cytokines pro-inflammatoires qui façonnent les réponses immunitaires innées et adaptatives. Cette voie s’articule avec la restriction antivirale, l’apoptose et le remodelage immunométabolique, et elle est étroitement régulée afin d’éviter une détection aberrante des ARN du soi. Une activité dérégulée d’IFIH1/MDA5 et de la signalisation des interférons a été associée à des phénotypes auto-inflammatoires et auto-immuns, et peut influencer la signalisation inflammatoire dans les contextes d’infection et d’immunité liée au cancer.
MDA5 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus IFIH1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de IFIH1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de IFIH1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de IFIH1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.