Plasmide CRISPR/Cas9 KO MCT12 (h): sc-407365

Présentation

SLC16A12 code le transporteur de monocarboxylates 12 (MCT12), un transporteur membranaire de la famille des transporteurs de solutés SLC16 impliqué dans le passage transmembranaire de petits acides organiques et de métabolites apparentés, qui contribuent à l’homéostasie métabolique cellulaire. En modulant la disponibilité des substrats de part et d’autre des membranes, MCT12 peut interagir avec des voies régissant la gestion du lactate et du pyruvate, l’équilibre rédox et le couplage métabolique entre compartiments cellulaires. Une altération de la fonction de SLC16A12 a été associée à des phénotypes oculaires, notamment la cataracte et des modifications de la physiologie du cristallin, ce qui étaye sa pertinence pour des études sur le transport épithélial, les flux de métabolites et le stress métabolique spécifique des tissus. Ces caractéristiques font de SLC16A12 une cible utile pour analyser comment le transport des monocarboxylates s’intègre au métabolisme énergétique cellulaire et aux fonctions de barrière/épithéliales.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MCT12 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SLC16A12 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SLC16A12, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SLC16A12 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MCT12.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SLC16A12 pour l'étude de la signalisation de MCT12, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SLC16A12 essentiels à la fonction de MCT12
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SLC16A12 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le MCT12 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le MCT12 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SLC16A12. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le MCT12 plasmide HDR (h) et le MCT12 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SLC16A12 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SLC16A12 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.