Plasmide Double Nickase (h) MCR: sc-400672-NIC

NR3C2 code pour le récepteur des minéralocorticoïdes (MCR), un récepteur nucléaire activé par un ligand qui se lie aux minéralocorticoïdes et aux glucocorticoïdes afin de réguler des programmes transcriptionnels contrôlant le transport épithélial du sodium, l’homéostasie du potassium, le volume du liquide extracellulaire et la régulation de la pression artérielle. Après liaison de l’hormone, le MCR se transloque dans le noyau et module l’expression génique via des éléments de réponse hormonale et des interactions avec des corégulateurs, en croisant la signalisation MAPK et des réseaux transcriptionnels inflammatoires. Dans le rein, le côlon et les tissus cardiovasculaires, NR3C2 influence le transport ionique dépendant d’ENaC/SGK1 et les réponses au stress cellulaire, reliant l’activité du récepteur à l’équilibre électrolytique et au remodelage tissulaire. Une dérégulation ou des mutations de NR3C2 sont associées à des troubles de la signalisation minéralocorticoïde, notamment des phénotypes de perte de sel et des altérations de la physiologie cardiovasculaire et rénale, ce qui souligne sa pertinence pour des études mécanistiques des voies endocrines et cardio-rénales.

MCR Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus NR3C2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de NR3C2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de NR3C2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de NR3C2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.