Plasmide CRISPR d'Activation (h) MCP-1: sc-401046-ACT

CCL2 code pour la protéine chimioattractante des monocytes 1 (MCP‑1), une chimiokine CC sécrétée qui dirige la chimiotaxie des monocytes, des lymphocytes T mémoire et des cellules dendritiques vers les sites de stress tissulaire. MCP‑1 transmet ses signaux principalement via CCR2 afin de coordonner le trafic des leucocytes, l’activation endothéliale et la polarisation des macrophages, en s’intégrant aux programmes inflammatoires dépendants de NF‑κB ainsi qu’aux réseaux de cytokines/chimiokines. Une expression dérégulée de CCL2/MCP‑1 est fréquemment associée à l’inflammation chronique, à la fibrose, aux dysfonctionnements métaboliques et au recrutement myéloïde lié aux tumeurs, ce qui en fait une cible/variable moléculaire largement utilisée pour étudier l’infiltration des cellules immunitaires et le remodelage du microenvironnement.

MCP-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CCL2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MCP-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CCL2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CCL2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MCP-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CCL2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MCP-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MCP-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de CCL2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.